Иммуноблот на вич: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

[contact-form-7 404 «Not Found»]

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Иммуноблоттинг (иммуноблот) – высокоспецифичный и высокочувствительный референтный метод, подтверждающий диагноз для пациентов с положительными или неопределенными результатами анализов, полученных в т.ч. при помощи РПГА или ИФА.

Этот метод выявления антител к отдельным антигенам возбудителя основан на постановке ИФА на нитроцеллюлозных мембранах, на которые в виде отдельных полос нанесены специфические белки, разделенные гель-электрофорезом.

Если имеются антитела против определенных антигенов – появляется темная линия в соответствующем локусе стрипа. Уникальность иммуноблота заключается в его высокой информативности и достоверности получаемых результатов.

Материалом для исследования является сыворотка или плазма крови человека. Для исследования на одном стрипе необходимо 1,5-2 мл крови или 15-25 мкл сыворотки.

По рекомендации ВОЗ иммуноблотинг (вестерн-блот) используется при диагностике ВИЧ-инфекции в качестве дополнительного экспертного метода, который должен подтверждать результаты ИФА. Обычно этим методом перепроверяют положительный результат при ИФА, поскольку он считается более чувствительным и специфичным, хотя более сложным и дорогим.

Иммунный блоттинг сочетает в себе иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим разделением белков вируса в геле и их переносом на нитроцеллюлозную мембрану. Процедура иммуноблота состоит из нескольких стадий.

Сначала предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов ВИЧ подвергается электрофорезу, при этом все входящие в состав вируса антигены разделяются по молекулярному весу.

Затем методом блоттинга антигены переносят из геля на полоску нитроцеллюлозы или нейлонового фильтра, которые отныне содержат невидимый пока глазом спектр белков, характерный для ВИЧ. Далее на стрип наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.

), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им полосками белков-антигенов. В результате последующих манипуляций (подобных ИФА) результат этого взаимодействия визуализируется – делается видимым. Наличие полос на определённых участках стрипа подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ.

Иммунный блоттинг чаще всего используют для подтверждения диагноза ВИЧ-инфекции. ВОЗ считает положительными сыворотки, в которых методом иммунного блотинга обнаруживаются антитела к каким-либо двум белкам оболочки ВИЧ.

Согласно этим рекомендациям, при наличии реакции только с одним из белков оболочки (gp160, gp120, gp41) в сочетании или без реакции с другими белками, результат считается сомнительным и рекомендуется повторное исследование, с использованием набора другой серии или другой фирмы.

Если и после этого результат остается сомнительным, исследования продолжаются через каждые 3 месяца.

Особенности

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Иммуноблот анализ – достоверный метод, который позволяет определить наличие антител к антигенам ВИЧ первого и второго типа. Если человек инфицирован, уже через две недели появляются антитела, которые могут обнаруживаться и намного позднее. Особенность ВИЧ в том, что количество антител быстро увеличивается и сохраняется в крови больного. Даже если они присутствуют, болезнь может не проявлять себя в течение двух и более лет. Метод ИФА не всегда точно определяет наличие заболевания, поэтому требуется подтверждение результатов с помощью иммуноблоттинга и ПЦР, если иммуноферментный анализ показал положительный результат.

Показания к назначению

Что это такое «иммуноблот» уже выяснили, но кому назначают данное исследование? Поводом сдать анализы на вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) методом иммуноблоттинга становится положительный результат ИФА.

Необходимо пройти через иммуноферментный анализ пациентам, которые будут оперироваться. Кроме этого, следует сделать анализ женщинам, планирующим беременность, а также всем, кто ведет беспорядочную половую жизнь.

Назначают иммуноблоттинг пациентам с ВИЧ, если результаты ИФА вызывают сомнения.

Поводом для обращения к врачу могут стать следующие тревожные симптомы:

  • резкое похудение;
  • слабость, потеря работоспособности;
  • расстройство кишечника (диарея), которое продолжается в течение трех недель;
  • обезвоживание организма;
  • лихорадка;
  • увеличение лимфатических узлов на теле;
  • развитие кандидоза, туберкулеза, пневмонии, токсоплазмоза, обострение герпеса.

Пациенту не нужно подготавливаться перед сдачей венозной крови. За 8-10 часов до исследования нельзя принимать пищу. Не рекомендуется за сутки до сдачи крови употреблять алкогольные и кофейные напитки, заниматься тяжелыми физическими упражнениями, испытывать волнение.

Как проводится исследование?

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

С точки зрения пациента иммуноблот никак не отличается от любого другого анализа: берется венозная кровь, исследуется и получается результат. Но если вдаться немного подробнее методику, то она очень не простая, но все же попробуем разобраться.

Вначале, на заводе-производителе реактивов, берется «эталонный» вирус иммунодефицита человека. Затем при помощи специальной процедуры (электрофореза) в гелевой среде вирус разрушается до его мельчайших составляющих: белков (антигенов вируса). Затем при помощи самого блоттинга (от англ.

промокания) частицы располагают на специальном материале – нитроцеллюлозе или нейлоновом фильтре, получается готовый к использованию индикатор, так называемый стрип.

Стрип – это полоска, в которой антигены распределены в зависимости от своей молекулярной массы, в четкой последовательности, то есть каждому миллиметру бумаги соответствует определенный белок.

Как вы, возможно, знаете если в крови человека присутствуют вирусы, то организм начинает вырабатывать против их оболочек (определенных белков) антитела, при чем для каждого вируса имеется свой индивидуальный набор белков-антигенов. Выявление антител к белкам-антигенам в крови есть основа метода иммуноблот. Ведь если антитело сталкивается с антигеном, то они непременно взаимодействуют друг с другом – «прилипают».

Так вот, антигены находятся на стрип-полоске и в случае наличия в крови исследуемого подходящих антигенов они обязательно взаимодействуют друг с другом а в этом месте, на стрип полоске, проявится индикатор – появится плоска (как тест на беременность). Причем в конкретном месте полоски, таким образом врач поймет есть ли в крови набор белков характерных для того или иного вируса.

Так, к примеру, при наличии на полоске потемнения в местах локализации белков gp160, gp120, gp41диагностируется ВИЧ, для других вирусов это будут совсем другой набор белков.

Нужно отметь, что иммуноблот позволяет точно установить наличие вируса только в том случае, если набор антител в крови является полным, то есть если белки gp160, gp120, gp41 присутствуют одновременно, то это 100% ВИЧ инфекция. А вот если хотя бы одного нет, к примеру: gp41 отсутствует, а есть только gp160, gp120, то тест расценивается как сомнительный и требует повторения.

Частые вопросы

Какие стадии включает иммуноблот?

  1. Подготовка стрипа.Предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов вирус иммунодефицита (ВИЧ) подвергается электрофорезу, при этом входящие в состав ВИЧ антигены разделяются по молекулярному весу.

    Затем методом блоттинга (аналог выдавливания на «промокашку» избытка чернил) антигены переносят на полоску нитроцеллюлозы, которая отныне содержит невидимый пока глазом спектр антигенных полос, характерный для ВИЧ.

  2. Исследование пробы.

    На нитроцеллюлозную полоску наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им (комплиментарными) антигенными полосами.

    В результате последующих манипуляций результат этого взаимодействия визуализируется – делается видимым.

  3. Трактовка результата.Наличие полос в на определённых участках нитроцеллюлозной пластины подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ.

  • Полоска А – Положительный контроль
  • Полоска В – Слабоположительный контроль
  • Полоска С – Отрицательный контроль
  • Полоска D – Положительный образец (обнаружено присутствие антител к ВИЧ-1)

Как расшифровать анализ?

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Если ИФА показал наличие всех или почти всех антител к антигенам согласно данной тест-системы, это обозначает положительный анализ на ВИЧ. Если ответ после проведения второго серологического иммуноферментного анализа положительный, то необходимо провести иммуноблот. Расшифровка результатов его будет более верной. Если иммуноферментный анализ дал положительный результат, следующий анализ иммуноблота так же показал наличие ВИЧ, то ставится заключительный результат.

Когда расшифровываются анализы, то надо знать, что положительный тест на ВИЧ определяется:

  • от 60% до 65% через 28 дней после заражения;
  • в 80% – через 42 дня;
  • в 90% – через 56 дней;
  • в 95% – через 84 дня.

Если получен ответ на ВИЧ положительный, то это будет означать, что выявлены антитела к вирусу. Чтобы избежать ложноположительного ответа, надо сдать повторно анализы, желательно два раза. Если антитела к иммунодефициту выявлены при сдаче двух анализов из двух либо при сдаче 3-х анализов в 2-х из них, то считается, что результат положительный.

Антиген р 24 можно выявить в крови уже через 14 дней со дня заражения. С помощью метода иммуноферментного анализа этот антиген выявляется от 14 до 56 дней. По прошествии 60 дней его в крови уже нет. Только когда в организме формируется СПИД, происходит повторно рост этого белка р24 в крови.

Поэтому тест-системы иммуноферментного анализа используются, чтобы обнаружить ВИЧ в первые дни заражения либо для того, чтобы определить, как протекает заболевание и контролировать процесс лечения.

Высокая аналитическая чувствительность иммуноферментного анализа обнаруживает антиген р24 в биологическом материале при ВИЧ первого подтипа в концентрации от 5 до 10 пкг/мл, при ВИЧ второго подтипа от 0,5 нг/мл и меньше.

Под сомнительным результатом иммуноферментного анализа подразумевается, что при диагностировании где-то ошиблись, как правило, что-то перепутали медицинские работники, или у человека есть признаки инфицирования, а результат отрицательный, что вызывает подозрение, человека направляют на повторную сдачу анализа.

Под ложноположительным результатом понимается результат, когда сдача анализов крови была сделана при следующих состояниях больного:

  • беременность;
  • если у человека нарушен гормональный фон;
  • при продолжительной иммунодепрессии.

Как расшифровать анализ в этом случае? Ложноположительный результат ставится, если выявляется хотя бы один белок. Из-за того, что антиген р24 очень зависит от индивидуальных вариаций, то, используя этот метод, в первый период заражения выявляется от 20% до 30% больных.

Насколько достоверен положительный результат теста?

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Иногда у ИФА бывают ложноположительные результаты (примерно в 1% случаев), причиной подобного результата может быть беременность, различные вирусные инфекции, а также простая случайность. После получения положительного результата необходим более точный тест – иммуноблот, по результатам которого и ставится диагноз. Положительный результат иммуноблота после положительного ИФА достоверен на 99,9% – это максимальная точность для любого медицинского теста. Если иммуноблот отрицательный, значит, первый тест был ложноположительным, и на самом деле ВИЧ у человека нет.

Что такое неопределенный (сомнительный) результат?

Если ИФА бывает положительным или отрицательным, то иммуноблот может быть положительным, отрицательным или неопределенным. Неопределенный результат иммуноблота, т.е.

наличие в иммуноблоте хотя бы одного белка к вирусу, может наблюдаться, если заражение произошло недавно и в крови еще мало антител к ВИЧ, в этом случае иммуноблот станет положительным через некоторое время.

Также неопределенный результат может появиться при отсутствии ВИЧ-инфекции при гепатите, некоторых хронических заболеваниях обменного характера, или при беременности. В этом случае, либо иммуноблот станет отрицательным, либо будет обнаружена причина неопределенного результата.

Сколько стоит анализ?

Иммуноблот на ВИЧ не относится к дешевым исследованиям. В среднем, скрининговое обследование иммуноферментными методами стоит от 500 до 900 рублей.

Иммуноблоттинг – это верификационное исследование, стоимость которого составляет от трех до пяти тысяч рублей. Более сложные методы стоят намного дороже.

Например, за анализ полимеразной цепной реакции (ПЦР) нужно будет заплатить около 12000 рублей.

Где сделать анализ?

Где можно сдать анализ на ВИЧ? ИФА, иммуноблот исследования проводят в городских частных клиниках, результаты выдают в течение суток. Возможна и срочная диагностика.

В государственных медицинских учреждениях анализы ИФА и иммуноблоттинг проводят бесплатно, согласно законодательству РФ.

В обязательном порядке проверку на инфекционные заболевания проходят беременные женщины, а также пациенты, которым предстоит госпитализация или оперативное вмешательство.

Источник: https://hcv.zydus.su/mogut-li-byt-oshibki-na-immunoblote-vich/

Иммуноблоттинг на ВИЧ — что это, для чего, когда нужен, результаты

Иммуноблоттинг на ВИЧ – это один из методов диагностики инфекции иммунодефицита. Подчеркнем – один из методов. Да, это высокоточный метод, но в большинстве случаев он применяется как “истина в последней инстанции”.

Диагностические процедуры чаще всего начинаются с ИФА. В случае сомнений в результатах может быть назначена процедура иммунного блоттинга. В любом случае иммуноблоттинг входит в диагностическую цепочку диагностики ВИЧ.

Метод сложный и дорогостоящий. По этой причине его применение обосновано в условиях неопределенности – то ли ставить диагноз, то ли он ложный.

Иммуноблоттинг – что это

Иммуноблоттинг – это методика лабораторных исследований сыворотки крови, позволяющая выявить наличие в крови специфических белковых соединений (антител).

Название метода происходит от английского Blot (пятно). В нашей медицине принят термин “блоттинг”. Поскольку метод относится к сложной теме из молекулярной биологии, подробно его рассматривать не будем. Остановимся только на моментах, которые необходимы для понимания диагностической цепочки.

Справочно. Основным в иммуноблоттинге является выделение необходимых белков из сыворотки крови, нанесение их на носитель с последующим анализом. Чтобы выделенные белки увидеть, их, например, окрашивают в какой-либо цвет (отсюда и пятно).

Метод диагностики иммуноблоттинг применяется для определения различных заболеваний. В диагностике ВИЧ он проявил себя эффективно.

Как проводится

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Связывание происходит строго по соответствующим полоскам антигенов на мембране. За счет этого становится возможна визуализация образовавшихся комплексов антиген-антитело.

При положительном анализе иммунного блоттинга появляются видимые полосы на определенных участках мембраны.

Также многие современные методики исследования иммуноблоттинга проводятся при помощи ИФА (иммуноферментный анализ) или иммуноокрашивания.

Для каждого конкретного исследования применяют специфичные к исследуемому белку антитела. За счет этого иммунный блоттинг относится к высокоточным исследованиям с низким уровнем погрешности.

Справочно. Иммуноблоттинг на ВИЧ используется для выявления в крови антител к вирусу иммунодефицита человека.

В некоторых лабораториях вместо классического иммуноблоттинга применяют линейную методику, относящуюся к непрямым иммунологическим исследованиям, позволяющим провести качественную оценку наличия аутоантител класса IgG.

Ифа и иммуноблоттинг на вич

  • Иммуноферментный анализ (ИФА) относится к лабораторным иммунологическим методам качественной или количественной диагностики в анализе крови специфических соединений (низкомолекулярные соединения, макромолекулы, вирусы).
  • В основе иммуноферментного анализа лежит реакция антиген-антитело.
  • При выявлении в анализе указанного комплекса (антиген-антитело) его отмечают с помощью специального фермента.

Иммуноферментный анализ достаточно прост в использовании и отличается высокой точностью.

В связи с этим, при диагностике инфекции его применяют в первую очередь.

Однако, согласно протоколам диагностики, такой серьезный диагноз на основании результатов одного ИФА не выставляется. Для подтверждения требуется обязательное проведение иммуноблоттинга на ВИЧ.

Справочно. Это связано с тем, что иммунный блоттинг отличается максимальной точностью. При получении нескольких положительных результатов иммуноблоттинга вероятность диагностической ошибки сводится к нулю.

Следует отметить, что в отличие от ИФА, иммунный блоттинг относится к сложным и весьма дорогостоящим методикам диагностики, поэтому он применяется только после получения 2 положительных анализов ИФА.

Анализ на ВИЧ и гепатит. Как и где сдать анализ бесплатно

В отличие от ИФА, иммунный блоттинг не дает ложноположительных результатов при наличии у пациента антител к Эпштейн-Барр вирусу, ревматоидному фактору, главным комплексам гистосовместимости HLA, при беременности.

В каких случаях назначается анализ

Анализ на ВИЧ назначается:

  • при выявлении у пациента генитального герпеса, гонореи, сифилиса и других заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП);
  • после незащищенного полового контакта с непроверенным партнером;
  • после нанесения татуировок или татуажа, выполнения пирсинга или проведения инъекционных косметологических процедур в нелицензированных заведениях;
  • после контактов с кровью инфицированного человека;
  • после использования игл, бритв, лезвий или хирургических инструментов, загрязненных биологическим материалом ВИЧ-инфицированного пациента;
  • при плановом обследовании перед получением гражданства, вида на жительство, при прохождении комиссии в военкомате, при прохождении профилактического осмотра перед поступлением в медицинский университет, при плановых профосмотрах (военные, хирурги);
  • при планировании беременности;
  • во время вынашивания ребенка;
  • при выявлении у пациента симптомов ВИЧ инфекции.

Симптомы ВИЧ на первых стадиях не специфичны. Заболевание может проявляться слабостью, постоянной сонливостью, вялостью, периодической лихорадкой, мышечными и суставными болями, хроническими тонзиллитами, увеличением лимфатических узлов, сыпью неясной этиологии.

  1. В редких случаях возможны постоянные головные боли, частая потеря сознания, снижение памяти, развитие энцефалопатии.
  2. Прогрессирует инфекция медленно, поэтому подобная неспецифическая симптоматика может наблюдаться на протяжении от 3 до 7 (и более) лет.
  3. В дальнейшем симптомы проявляются в виде оппортунистических инфекций (сопутствующие инфекционные заболевания, развивающиеся на фоне снижения иммунитета из-за прогрессирующего ВИЧ).

Максимальная эффективность лечения достигается на стадии неспецифических проявлений. Поэтому, при наличии факторов риска заражения (инъекционная наркомания, частые незащищенные половые контакты с непроверенными половыми партнерами и т.д.) требуется регулярно проверяться на ВИЧ.

Иммуноблоттинг на ВИЧ – где сдать

Анализ на иммуноблоттинг можно пройти в центре СПИДа или частных лабораториях. По желанию пациента обследование может быть проведено анонимно.

Антитела к вирусу иммунодефицита человека появляются в крови зараженного человека уже через 2 недели после заражения.

Однако, для получения максимально точных результатов следует провести 2-3 теста на ВИЧ инфекцию. Чаще всего проводят обследование на 6 и 12 неделе после предполагаемого заражения.

Может быть проведено экстренное обследование (при возможности назначения ранней постконтактной профилактики).

Вероятность выявления положительного иммуноблоттинга на ВИЧ во многом зависит от времени, прошедшего от момента заражения.

Справочно. Через месяц после заражения анализ положителен у 60% пациентов, спустя 45 дней – у 80%, через 3 месяца антитела выявляются практически у 100% инфицированных.

В связи с этим, перед обследованием на ВИЧ требуется проконсультироваться с врачом СПИД-центра. Консультации проводятся анонимно. Специалист расскажет о том, как может передаваться вирус, как предохраняться от заражения, рассчитает срок, когда лучше пройти обследование и сколько раз необходимо сделать анализ.

Также по показаниям может быть назначена ранняя профилактика.

Результат иммуноблоттинга должен трактоваться исключительно специалистом. Самостоятельное назначение обследования в частном центре и расшифровка результатов «по интернету» может привести к диагностическим ошибкам и тяжелейшим последствиям для здоровья.

В СПИД-центре после анализа проводится послетестовая консультация. При выявлении положительного иммуноблоттинга врач назначает дополнительные обследования, на основании результатов которых пациенту подбирается комплексная антиретровирусная терапия.

Как проводится анализ на ВИЧ

Справочно. Согласно официальным протоколам диагностики ВИЧ-инфекции, в первую очередь проводится скрининговое исследование при помощи методики ИФА. Дальнейшая диагностика зависит от результатов первого исследования.

Если ИФА не выявил антител к ВИЧ и вирусных антигенов, обследуемому выдается отрицательный результат. Дальнейшее обследование не выполняется.

Исключение могут составлять случаи, при которых пациент не уверен в точных сроках предполагаемого инфицирования. Для уточнения может быть рекомендовано повторное прохождение теста через 6-12 недель (для исключения ложноотрицательных результатов).

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Анализ на ВИЧ — сколько стоит и где можно сдать

В дальнейшем врач назначает количественную ПЦР диагностику для определения активности вируса и вирусной нагрузки. Может быть назначена также вирусологическая диагностика, позволяющая идентифицировать тип вируса (ВИЧ1 или ВИЧ2).

Как подготовится к обследованию

Для исследования сыворотки на ВИЧ методом иммуноблоттинга используется венозная кровь.

Забор крови проводится натощак. За два дня до исследования рекомендовано исключить употребление спиртных напитков. Утром перед забором крови не рекомендовано курить.

Также за 1-2 дня до исследования рекомендовано исключить тяжелые физические нагрузки и стрессы.

Иммуноблоттинг – цена

Цена на исследование крови на ВИЧ методом ИФА начинается от 500-700 рублей (цена в частных лабораториях).

Иммуноблоттинг проводят преимущественно в СПИД-центрах по направлению иммунолога. Обследование в специализированных центрах проводится бесплатно.

Тесты для диагностики ВИЧ

  • Для диагностики ВИЧ существуют тест системы 3-го поколения (без антигенов) и 4-го поколения (с антигенами).
  • Тест системы первых двух поколений больше не производятся и считаются устаревшими.
  • На территории Российской Федерации используют только тест-системы четвертого поколения.
  • Старые тест системы уже не используются, поэтому при правильном прохождении обследования (двукратное ИФА и иммуноблоттинг) вероятность получения ложных результатом сводится к нулю.

Иммуноблоттинг – расшифровка результатов

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализИммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Справочно. Получение положительного иммуноблоттинга на ВИЧ означает, что в крови пациента были обнаружены антитела к двум или трем специфическим гликопротеинам вирусной оболочки ВИЧ (GP41, 120 и 160).

Иммуноблоттинг при беременности

Справочно. Беременность может приводить к получению ложноположительных результатов ИФА. Такая ситуация наблюдается достаточно редко, однако, ее необходимо учитывать при трактовке результатов анализа.

В связи с этим, беременным при получении сомнительного или положительного анализа назначают повторный тест ИФА через 2-3 недели.

После этого, при получении повторного сомнительного или положительного результата, назначается иммунный блоттинг на ВИЧ.

При получении отрицательного иммунного блоттинга – ВИЧ исключается. При получении положительных результатов пациентке назначается дополнительное обследование (определение вирусной нагрузки, ПЦР, вирусологическая диагностика, определение уровня СD клеток).

В дальнейшем, в зависимости от сроков беременности и результатов дополнительного обследования назначается профилактика передачи вируса плоду. Вся профилактика назначается согласно протоколам ВААРТ.

Для профилактики заражения плода используются специальные препараты, разрешенные для лечения беременных.

У новорожденных, рожденных от матерей с ВИЧ, кровь исследуют методом ПЦР. Выбор метода связан с тем, что методы иммунного блоттинга и ИФА у таких детей не информативны до 18-ти месяцев жизни.

Методики иммунного блоттинга и ИФА у таких новорожденных могут давать ложноположительные результаты из-за выявления материнских антител.

Своевременно начатая профилактика уменьшает риск заражения ребенка. Поэтому для беременных крайне важна своевременная диагностика ВИЧ. В идеале обследование стоит пройти обоим половым партнерам еще на этапе планирования беременности.

Типичные ошибки при диагностике ВИЧ

Основная ошибка – это слишком раннее прохождение тестов (в период «серологического окна» когда в крови еще нет антител).

Внимание. Также к ошибкам относится самоназначение и обследование в частной лаборатории. Без иммунолога сложно подсчитать возможный период «серологического окна» и правильно трактовать результаты обследования.

Еще необходимо учитывать вероятность получения ложноположительных результатов ИФА у беременных и пациентов с вирусом Эпштейн-Барр.

Для исключения ошибок, обследование рекомендовано проходить в СПИД-центре под контролем иммунолога.

Источник: https://testanaliz.ru/immunoblotting-na-vich

Типичные ошибки при диагностике ВИЧ-инфекции

22.12.2006 просмотров: 8497

При диагностике ВИЧ-инфекции часто встречается типичная ошибка, когда диагноз ВИЧ устанавливается на основании какого-нибудь лабораторного теста, к которому у врача по той или иной причине возникает чересчур сильное доверие. Диагностика ВИЧ-инфекции включает в себя два этапа: установление собственно факта зараженности ВИЧ-инфекцией и определение стадии заболевания.

За определением стадии неразрывно следует и выяснение характера течения заболевания, а затем и формирование прогноза у данного человека, а также выбор тактики лечения.

Как известно, диагностика любого инфекционного заболевания основана на сопоставлении эпидемиологических, клинических и лабораторных данных, и преувеличение значения одной из групп этих данных может привести к диагностическим ошибкам.

С самого начала следует предупредить читателя, что при диагностике ВИЧ-инфекции часто встречается типичная ошибка, когда диагноз устанавливается на основании какого-нибудь лабораторного теста, к которому у врача по той или иной причине возникает чересчур сильное доверие.

Некоторые работники лабораторий даже сами берут на себя смелость устанавливать диагноз ВИЧ-инфекции, никогда не видя пациента. Иногда клиницисты также безоговорочно доверяют результатам лабораторных исследований, которые могут служить только как отдельные свидетели в деле выявления ВИЧ-инфекции.

За те тринадцать лет, что мы наблюдаем ВИЧ-инфекцию в России, нам пришлось видеть десятки, если не сотни, случаев ошибок, связанных с фанатичным доверием некоторых врачей к лабораторному анализу. Мы можем не останавливаться на сплошь и рядом встречающихся «обыкновенных» ошибках, которые возникают при перепутывании сывороток, неправильном заполнении документации и т. п.

Клиницист просто обязан знать «диагностическую ценность» того или иного метода. Нам известен случай, когда в Санкт-Петербурге в результате неумелого использования какого-то «нового» метода, один «ученый» выдал диагноз «ВИЧ-инфекция» совершенного здоровому и неинфицированному человеку (которого он, кстати, никогда не видел), в результате чего последний покончил с собой.

Другой, не менее «выдающийся ученый», несколько лет водил за нос руководство одной бывшей советской республики, доказывая, что население этой страны «поражено эпидемией СПИДа», поскольку разработанный им «сверхчувствительный» метод исследования «выявляет ВИЧ-инфекцию у зараженных намного раньше, чем все другие известные методики».

В обоих случаях речь, конечно, шла о ложных реакциях, которые давали их «новейшие методы». Как мы уже отмечали, новые методы диагностики должны подтверждаться старыми, а не наоборот.

Поэтому нашей общей рекомендацией для клиницистов и эпидемиологов является скептическое отношение ко всем «новейшим» методикам, до тех пор, пока они не «устареют», то есть пока не станут известны все их достоинства и недостатки.

В текущей ситуации это прямо касается диагностики на основе полимеразной цепной реакции — ПЦР (PCR) и прочих «геннодиагностических методов», с помощью которых отдельные исследователи уже «обнаружили СПИД у египетских мумий» и «уже начали обнаруживать его у крыс». Последние достижения лишь показывает, что для полной адаптации данных методик для нужд медицины понадобится еще несколько лет.

В силу сложившейся в России традиции миллионы людей обследуются на антитела к ВИЧ без определенных показаний, и в большинстве случаев врач сначала получает данные исследования (положительная реакция на антитела к ВИЧ), а лишь потом видит самого больного и может его опросить. При таком положении вещей быстро забывается, что лабораторное исследование служит лишь подтверждением клинического.

В тех же случаях, когда врач уже знает, что у осматриваемого пациента выявлены антитела к ВИЧ, он легко может ошибиться, пойдя на поводу у бумажки с соответствующей записью. Практический интерес представляют случаи, когда пациент находится в стадии инкубации или стадии первичных проявлений ВИЧ и количество антител в его крови еще слишком мало для выявления.

Тем не менее, при достаточном опыте инфекционисты довольно быстро распознают эти случаи. К числу наиболее изученных и распространенных относится метод обнаружения антител к ВИЧ. Так как ВИЧ-инфекция в большинстве случаев длится пожизненно, то для диагностики достаточно самого факта обнаружения антител.

При ВИЧ-инфекции, в отличие от других инфекций, в большинстве случаев нет необходимости использовать парные, то есть взятые через определенный временной промежуток, сыворотки. Обнаружение антител, в принципе, может выявить более 99% инфицированных ВИЧ лиц.

Некоторые сложности связаны с тем, что антитела к ВИЧ отсутствуют в первые недели после заражения, а также их количество может заметно снижаться в терминальном периоде заболевания. Имеются сведения об отдельных, но достаточно редких случаях ВИЧ-инфекции, когда антитела длительно не обнаруживаются или исчезают на сравнительно длительный срок.

Все известные тест-системы имеют некоторые ограничения по своей возможности выявлять все сыворотки, содержащие антитела к ВИЧ, ( по чувствительности ) уже хотя бы потому, что количество этих антител может быть очень небольшим, особенно в начальный и финальный периоды болезни.

Однако в модельных опытах с заранее известными заведомо позитивными сыворотками («диагностическая панель сывороток») чувствительность некоторых тест-систем может достигать 100% — то есть они выявляют все заведомо «положительные» сыворотки, использованные в данном эксперименте.

При этом, разумеется, не следует забывать, что лица, проводящие испытания, могут случайно или сознательно подбирать сыворотки с теми или иными особенностями, что влияет на результат испытания. В то же время и ложноположительные реакции присущи практически всем тест-системам.

Это связано с тем, что в исследуемых материалах могут присутствовать антитела к антигенам, сходным с антигенами ВИЧ, или примесям к антигену. Так, при классической методике получения антигена ВИЧ из лизата клеточных культур вируса в конечном продукте обнаруживаются фрагменты лимфоцитов, антитела к которым могут давать ложные реакции (5) и т.п.

Отмечено, что по мере повышения чувствительности теста, отмечается тенденция к увеличению числа ложноположительных реакций.

На практике к этому добавляются также ложноотрицательные и ложноположительные результаты, возникающие из-за ошибок персонала, ухудшения качества систем из-за транспортировки и хранения в неправильных условиях, из-за снижения качества тест-систем вследствие длительного хранения.

Поэтому, наряду с со специфичностью и чувствительностью, определенными в лабораторных условиях иногда определяют эти параметры в «полевых» условиях, то есть такими, какими они достаются практическому здравоохранению. Как правило «полевые» характеристики, вследствие вышеперечисленных причин ниже лабораторных. На результаты использования тест-систем могут оказывать влияние даже такие факторы, как качество используемой для промывания посуды воды и т.п. Чаще всего антитела к ВИЧ обнаруживают иммуноферментными методами. Принципиальных различий в многочисленных коммерческих тест-системах для твердофазного иммуноферментного анализа нет, хотя по чувствительности и специфичности они могут существенным образом отличаться. Довольно часто наблюдается, что одни и те же сыворотки дают различные результаты при использовании различных тест-систем. Отсюда, безусловно, признано, что «положительные» результаты обследования в одной тест-системе нельзя считать безусловно «истинно-положительным» результатом. В связи с этим предложен и используется ряд методов для проверки специфичности результатов обнаружения антител. Среди этих методов наиболее часто применяют реакцию «иммунный блотинг» или «иммуноблот» в модификации Western Blot. (В этом красивом ученом названии «blot» переводится скорее всего как «клякса», а «western» — как «западная» отражает направление распространения этой «кляксы» по бумаге слева направо, то есть на географической карте это соответствует направлению с запада на восток.»). Суть метода «иммунный блот» заключается в том, что иммуноферментную реакцию проводят не со смесью антигенов, а с антигенами ВИЧ, предварительно распределенными методом иммунофореза по фракциям, располагающимся согласно молекулярному весу по поверхности нитроцеллюлозной мембраны. В результате основные белки ВИЧ, носители антигенных детерминант, распределяются по поверхности в виде отдельных полос, которые и проявляются при проведении иммуноферментной реакции. Методом, теоретически упрощающим диагностику, является методика обнаружения антител к ВИЧ в слюне, которая в настоящее время приближается по чувствительности к обнаружению антител в крови, но пока значительно уступает по специфичности, то есть, дает большее количество ложноположительных результатов.

Кроме иммуноферментных, с успехом развиваются и другие методы обнаружения антител в крови: агглютинационный, иммунофлюоресцентный, радио-иммунопреципитационный и другие.

Источник: http://www.menstime.ru/

Источник: https://xn--b1am9b.xn--p1ai/news.html?id=2232

Ложноположительный анализ на ВИЧ — каковы причины получения неточного результата?

С каждым годом несмотря на появление современных методов лечение проблема с распространение ВИЧ-инфекции постоянно растет. При этом уровень жизни в стране стал оказывать несущественное влияние на вероятность заболевания. Ежегодно от СПИДа умирает большое количество людей.

Несмотря на то, что врачи говорят о возможности существенно продления жизни, на практике это выходит не всегда. Важным моментом можно назвать своевременное обнаружение вируса при проявлении первичной симптоматики.

В этом случае человек может своевременно перестроить свою жизнь, отказаться от вредных привычек и начать пристально следить за своим здоровьем. Если вирус обнаруживается на второй или последней стадии развития заболевания, то вероятность продления жизни очень мала.

Это связано с тем, что за несколько лет его развития сильного поражается иммунная система, вследствие чего начинают развиваться заболевания, которые редко встречаются у человека. При этом даже обычные заболевания проявляются в самой тяжелой форме.

Именно поэтому следует своевременно проводить анализы, так как если положительный анализ на ВИЧ, то следует немедленно начинать лечение. Однако есть довольно распространенные случаи, при которых тестирование привод к получению ложноположительного результата по проверке на ВИЧ. Рассмотрим все особенности проведения рассматриваемой диагностики.

Именно поэтому следует своевременно проводить анализы, так как если положительный анализ на ВИЧ, то следует немедленно начинать лечение

Анализы на ВИЧ или СПИД — в чем разница?

Для начала следует разобраться в том, есть ли разница в ВИЧ-инфекции и СПИДе, а также то, как проводится их проверка. Выделим следующие основные моменты:

  1. Иммунитет поражает именно ВИЧ-инфекция, а СПИД является конечной стадией его развития.
  2. От момента заражения до того, как развивается иммунодефицит может проходить несколько лет, при должном лечении, несколько десятков лет.
  3. Сама инфекция вызывает симптомы на первой стадии развития, которые можно спутать с симптомами ОРВИ или гриппа.

Таким образом можно скачать, что положительный или отрицательный результат дается на определение ВИЧ-инфекции. Что касается СПИДа, то для определения стадии развития заболевания проводится более сложное исследование. Поэтому положительный тест на определение ВИЧ становится причиной проведения других исследований.

Лабораторные исследования

Возможна ли ошибка при получении положительного результата? К сожалению, при исследовании сданного образца обычным методом может быть допущена ошибка.

Рассмотрим особенности ложноположительного анализа на ВИЧ и причины его получения.

Довольно часто предпосылками для подобного изучения крови становится обычное исследование сданного образца при, к примеру, диагностировании ОРВИ или гриппа. Довольно редко люди ходят целенаправленно проверяться на ВИЧ-инфекцию. Только после сдачи крови на тест, который разработан для определения рассматриваемой инфекции, можно исключить вероятность получения ложноположительного результата.

Как и многие другие вирусы, ВИЧ становится причиной существенного повышения концентрации антител в крови. Однако этот показатель может указывать и на многие другие проблемы со здоровьем. При высокой концентрации антител врачи и сам пациент должны насторожиться, так как причина все же может быть связана с заражением ВИЧ-инфекцией.

Возможна ли ошибка при получении положительного результата? К сожалению, при исследовании сданного образца обычным методом может быть допущена ошибка.

Довольно частым вопросом мужчин и женщин можно назвать то, сколько нужно ждать для получения результата и какие есть сроки, в которые должны быть проведены исследования. Специалисты указывают на то, что исследование сданного анализа может быть проведено в течение 5-6 месяцев после его сдачи.

В течение столь длительного времени вирус не пропадает из взятых анализов. Как правило, исследования могут быть проведены в течение 2-3-х недель.

Диагностика ВИЧ проводится двумя этапами:

  1. ИФА.
  2. Метод иммуноблотинга.

Первый этап проводится для того, чтобы отсеять здоровые антитела от подозрительных. Однако этого метода недостаточно для постановки окончательного диагноза. На этом этапе результат может быть ложноположительным.

Более сложным и точным методом определения ВИЧ-инфекции считается иммуноблотинга. Именно этот метод позволяет получить точный результат, на который можно опираться при постановке диагноза.

Суть этого метода заключается в разрушении вируса на антигены, после чего проводится подробное изучение антител. В данном случае ошибочным результат может быть реже, чем при выполнении только первого этапа.

Однако даже он не дает 100% гарантии точности, так как в некоторых случаях полученная информация может быть причиной постановки неверного диагноза.

Мировая практика определения ВИЧ-инфекции указывает на распространение ложноположительных результатов.

Это связано с тем, что многие заболевания могут стать причиной получения подобного ответа на исследование сданного образца на присутствие ВИЧ-инфекции.

При этом ИФА делается только по рекомендации врача для воссоздания общей клинической картины. Лишь только при проведении второго метода врачи мочь поставить более точный диагноз.

На протяжении многих лет довольно часто можно было встретить предостережение, что именно на момент сдачи крови можно заразиться ВИЧ.

Однако современные меры предосторожности, которые заключаются в использовании только одноразовых инструментов при сборе крови, определяет то, что вероятность заражения на момент посещения парикмахерской гораздо выше. Поэтому не стоит боятся идти сдавать кровь по этому поводу.

Особенности развития ВИЧ-инфекции в организме определяет то, что даже при использовании современных методов исследования и оборудования выявить антитела не всегда возможно.

Это связано с тем, что у каждого человека этап размножения вируса проходит по-разному.

Специалисты указывают на то, что при сдаче крови в течение менее чем месяца после вероятного заражения есть вероятность получения результата, который будет ложный: как отрицательным, так и положительным.

Как исключают вероятность получения ложного результата исследований крови?

Тот момент, что полученный результат может быть, как ложноположительным, так и ложноотрицательным определяет некоторые рекомендации к проведению исследований крови.

Как правило, после получения результата после первой сдачи крови также назначается и второе, повторное исследование через некоторое время. Довольно часто причинами получения разных результатов становится несоблюдение правил по сдаче образца.

При этом ошибка персонала медицинского учреждения, которое специализируется на определении ВИЧ или СПИДа, практически равна нулю.

Более сложным и точным методом определения ВИЧ-инфекции считается иммуноблотинга

Стоит помнить о том, что перед сдачей анализов не рекомендуют принимать в пищу кислые, острые, жареные продукты, минеральную газированную воду.

В независимости от того, в каком количестве проводилось употребление рассматриваемых продуктов, есть вероятность получения ложного результата.

Поэтому при рассмотрении того, может ли лаборант ошибиться при сборе анализов следует обратить внимание на соблюдение рекомендация по тому, что можно, а что нельзя употреблять, делать перед проведение рассматриваемой процедуры.

Также снизить вероятность ошибки при исследовании можно при выборе медицинского учреждения, которое специализируется на проведении рассматриваемый исследований. На 100% можно быть уверенным в получении точного результата только при проведении повторных исследований через полгода, так как столь длительного инкубационного периода у ВИЧ-инфекции пока не наблюдался.

Что такое инкубационный период и как он определяется?

Как показывают результаты многолетних исследований, при начально стадии заражения в 99% случаев рассматриваемый вирус себя практически никак не проявляет.

Степень проявления вируса зависит от общего состояния организма и иммунной системы.

При этом уже на момент протекания инкубационного периода вирус может передаваться, чаще всего, половым путем и при использовании одних и тех же бритвенных принадлежностей.

Также при рассмотрении инкубационного периода следует обратить внимание на нижеприведенные моменты:

  1. Как правило, изначального сдается ИФА после протекания 3-6 месяцев с момента вероятного заражения.
  2. В некоторых случаях вирус проявляется после прохождения 2-х месяцев с момента заражения. Однако эта ситуация наблюдается довольно редко.
  3. Первичная симптоматики может проявиться гораздо позже или вообще отсутствовать.

При этом по внешнему виду то, у кого есть ВИЧ-инфекция практически не определить. Поэтому как бы хорошо не выглядел новый половой партнер, рекомендуется использовать контрацепцию, так как она существенно снижает риск заражения, но не дает 100% гарантии защиты.

Какие причины получения ложноположительного результата?

В последнее время большой популярностью пользуется метод проведения анализа в домашних условиях анонимно. Однако стоит учитывать, что именно в подобном случае есть большая вероятность допущения ошибки, которая приведет к получению ложноположительного результата.

Снизить вероятность получения ложного результата можно путем сдачи анализов в квалифицированных лабораториях. Специалисты знают то, как снизить вероятность ошибки до 0,01%. Однако этот показатель не учитывает то, что на результат может повлиять определенное состояние пациента, наличие иных скрытых инфекций и хронических заболеваний.

На 100% можно быть уверенным в получении точного результата только при проведении повторных исследований через полгода, так как столь длительного инкубационного периода у ВИЧ-инфекции пока не наблюдался.

К наиболее распространенным причинам получения ложноположительного результата можно отнести:

  1. Наличие других инфекций.
  2. Довольно часто сложно определить с высокой точность ВИЧ при беременности. При этом в группу риска попадают женщины, которые уже рожали несколько раз.
  3. При многократной сдаче крови в качестве донора.
  4. При активной развитии вируса гриппа или герпеса, как с проявлением клинических симптомов, так и без них.
  5. При инфекционном поражении дыхательных систем.
  6. При заболевании, которое приводит к существенному повышению густоты крови.
  7. При первичной стадии развития аутоиммунных заболеваний.
  8. При попадании вируса герпеса и туберкулеза.
  9. При плохом показателе свертываемости крови, что является генетическим заболеванием.
  10. При сдаче анализов на момент лихорадки, которая возникла по разным причинам.
  11. При артрите.
  12. Развитие онкологических заболеваний на различной стадии.
  13. При недавнем проведении пересадки органов.
  14. Заболевания, приводящие к поражению сосудов.
  15. При существенном повышении уровня антител по неизвестной причине.
  16. При развитии различных видов склероза.
  17. Если сдача анализов проводится женщиной на момент прохождения критических дней.
  18. При повышении билирубина.

Существует довольно много процессов, которые могут стать причиной получения ложноположительного результата. К примеру, аллергия в крови становится причиной развития антигенов, которые могут быть распознаны как чужеродные. На момент беременности постановка диагноза осложняется по причине гормонального сбоя, но это происходит не у всех женщин.

Возможные ошибки медиков

Ложноположительный результат может быть получен при ошибке медиков. Это случае по причине:

  1. Нарушения требований к условиям транспортировки собранного анализа.
  2. Применение неправильных или некачественных сывороток, которые являются основой метода ИФА.
  3. При нарушении установленных правил забора генетического материала.
  4. При нарушении правил хранения крови.

К сожалению, врачебные ошибки довольно часто встречаются в медицинских заведениях небольших городов.

В центрах контроля распространения ВИЧ-инфекции вероятность того, что медицинский персонал нарушит установленные правила очень мала.

Также снижается вероятность ошибки при сдачи анализов в платных медицинских учреждениях, так как доказанный факт допущения ошибки, что повлекло к моральному и материальному ущербу клиента, может стать причиной отбора лицензии.

Источник: https://proinfekcii.ru/virusnye/vich-spid/lozhnopolozhitelnyj-analiz-na-vich.html

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector